单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗原外来物种特情人、寡核苷酸装饰成本低高出平常许多的或运作工作流程复杂性。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯老师创业团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低投入、跨植物物种、全网络平台兼容的全新解决方案。

期刊论文详细介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由全国菌物学分析合理院遗传基因性基因性与健康菌物制品学探讨所和全国遗传基因性基因性临床会主办人的全球科研性杂志杂志，全力于宣传报道生命安全菌物学分析合理和临床遗传基因性基因性学这个域行业的媚足性探讨收获。JGG 202多年度导致指数公式7.1，Scopus科研性杂志杂志评定要求CiteScore 9.9，跻身JCR 202多年度GENETICS & HEREDITY这个域行业Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY这个域行业Q1区，跻身全国菌物学分析合理院杂志杂志分区域菌物制品学学科门类1区(Top杂志杂志)，遗传基因性基因性学和生化学与原子菌物制品学小类双1区。

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甚么是HEATag

精妙的“二融合”规划

HEATag是由凝集素和HUH内切酶包括的交融蛋白质

「位置器」控制器 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化遮盖（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「接器」摸块 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）引索条型码开展共价衔接。

“1+1>2”的效果好：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行模板标注与产品追溯。

Fig1: HEATag多沉标注操作过程表示图

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实战技巧检则

HEATag那么到底有大多能打？

就可以在不相同状态下，完成喂奶绿色癌细胞膜系单癌细胞膜混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究探讨销售团队为 HEATag 设立了多轮 “压为测量”，从神经细胞膜系到神经细胞膜核，从常温下到超高温，从新鲜模板到紧固模板，全多方面核实它的可信度性和可信度性。

首个轮測試根据蒲乳期動物体受损上皮细胞系：研究方案的人员选了来自于人、鼠、仓鼠5个动物群的4种体受损上皮细胞（HEK293T、K562、MEF、CHO），在常温下要 HEATag 标记图片后混合着测序。既定收废的 11447 个体受损上皮细胞中，85.66% 都能使用 HEATag 条状码最准连接到原动物群，样表间交叉点破坏稀少，UMAP 聚类讲解法讲解还简单材料，HEATag 条状码与动物群特女性朋友基因组组特征描述相对高度不对。 又，考试环境进那步自动升级：探索考生来尝试在 4℃下商品标签鲜新度体人体人体神经元、在室内温度下商品标签甲醇固定的不动体人体人体神经元，甚至于就直接商品标签体人体人体神经元结构。报告单已然鲜亮：那些环境下，样版商品标签与动物群资讯均极具较好的相关，分拆最准率超 95%。就算是甲醇固定的不动会出现轻微的的转录本交差影响，体人体人体神经元结构制作可能会有少许 RNA 溜走，体人体人体神经元的类型的批注报告单已然与鲜新度样版坚持不对，声明书 HEATag 就能够商品标签不一样的补救环境下的实验性样版。

Fig2: HEATag 可在不一样的必要条件下完整单生殖细胞转录组混样定量分析

都可以符号哺乳期小宠物和海域无脊椎神经小宠物的原代组织细胞

如说細胞膜系考试是 “地基题”，那阻止模本即是 “扣减题”， 以下模本往往会因細胞膜型冗杂、学习环境认知性特殊的，是标出技能的 “疑难问题”，而 HEATag 恰恰舞在以下 “疑难问题” 上增添了优越。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸阻止，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不能被更准划分，大多数最主要血细胞型号的聚类算法毕竟都明显可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海域动物的兼容性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条状码与植物物种转录组有着较高不同性，不存在存在因高盐环境造成 的 “标注报废”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可控制蒲乳期动植物聚集范例多沉 scRNA-seq 了解

Fig4: HEATag可变现新鲜度海洋环境无脊椎骨生物诸多 scRNA-seq 进行分析

HEATag与细胞核的相结合不容易受到转录组的明显改进

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在达到标注任務的时，不对后期的转录酚类化合物析造干忧，维持了调查统计资料的真正性。

Fig5: HEATag不懂作用样品的 RNA 表达出来策略

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未来生活可期

HEATag 能为单血细胞探析带去之类？

HEATag 的价值量，远禁不住于 “很好解决标出情况”，它的灵活机动性和共通性，正为单内部学习打开比较多或许性

从应用不一样了解

HEATag 能所覆盖从 “简易非常介绍”（如癌团队图片与平常团队图片、药操作与对比）到 “大建设投资额论述”（如团队图片上皮体细胞图谱生成、高通骁龙量具体需求）的全范围图具体需求。随之 PIP-seq、Stereo-cell 等新款可扩张新技术的成长 ，HEATag 还能进步大幅提升单上皮体细胞论述的通量，推助科技创新团队图片开始更多建设投资额的大型项目。

从跨各个领域发展潜力来谈

HEATag 实际上不适应用于转录组学，还能与表观基因组组学、营养物质质组学、区域空间组学等高技术水平紧密联系，根据私人定制目录和寡核苷酸字段，HEATag 是还不错轻易加上不一的组学流量，不引响移动信号获取深度.。并且，鉴于HEATag还是还不错快速发展单細胞糖组学的研究高技术水平。

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达成合作静态

拜谱海洋生物与陈凯博士生导师形成第一次公司合作有意愿

不错特别关注的是，在 HEATag 技艺体显现出极大的应运价值的图片背景下，拜谱菌物已与我国南部海域环境物理学与过程中广东省实践报告室（武汉）陈凯教学达到开始战略合作协议但这并。当事人计划方案围绕着 HEATag 技艺的品牌化支撑、学习课题变为等目标方向选取高度优势互补，推动哪一成本低费用、跨鱼类的单細胞膜标志技艺更加快应运于实际情况学习课题消费场景，为多实践报告室带来高质量、金钱的单細胞膜学习器具，电子助力学习课题工做者在細胞膜菌物学、海域环境菌物学、发病体制等方向要先拿到多推动